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如果L1210/DDP细胞株细胞发生微生物污染时,应如何处理?

点击次数:228 发布时间:2018-07-21
  L1210/DDP细胞株在无菌环境下从机体取出某种组织细胞(视实验目的而定),经过一定的处理(如消化分散细胞、分离等)后接入培养器血中,这一过程称为取材。如是L1210/DDP细胞株的扩大培养则无取材这一过程。机体取出的组织细胞的首次培养称为原代培养。理论上讲各种动物和人体内的所有组织都可以用于培养,实际上幼体组织(尤其是胚胎组织)比成年个体的组织容易培养,分化程度低的组织比分化高的容易培养,肿瘤组织比正常组织容易培养。取材后应立即处理,尽快培养,因故不能马上培养时,可将组织块切成黄豆般大的小块,置4℃的培养液中保存。取组织时应严格保持无菌,同时也要避免接触其他的有害物质。取病理组织和皮肤及消化道上皮细胞时容易带菌,为减少污染可用抗菌素处理。
  如果L1210/DDP细胞株细胞发生微生物污染时,应如何处理?
  原则上:直接灭菌后丢弃之。
  当L1210/DDP细胞株重要的培养污染时,研究者可能试图消除或控制污染。首先,确定污染物是细菌、真菌、支原体或酵母,把污染细胞与其它细胞系隔离开,用实验室消毒剂消毒培养器皿和超净台,检查HEPA过滤器。
  L1210/DDP细胞株高浓度的抗生素和抗霉菌素可能对一些细胞系有毒性,因而,做剂量反应实验确定抗生素和抗霉菌素产生毒性的剂量水平。这点在使用抗生素如两性霉素B和抗霉菌素如泰乐菌素时尤其重要。下面是推荐的确定毒性水平和消除培养污染的实验步骤。
  1.L1210/DDP细胞株在无抗生素的培养基中消化、计数和稀释细胞,稀释到常规细胞传代的浓度。
  2.L1210/DDP细胞株分散细胞悬液到多孔培养板中,或几个小培养瓶中。在一个浓度梯度范围内,把选择抗生素加入到每一个孔中。例如,两性霉素B推荐下列浓度,0.25,0.50,1.0,2.0,4.0,8.0 mg/ml。
  3.每天观测细胞毒性指标,如脱落,出现空泡,汇合度下降和变圆。
  4.确定抗生素毒性水平后,使用低于毒性浓度2——3倍浓度的抗生素的培养液培养细胞2——3代。
  5.L1210/DDP细胞株在无抗生素的培养基中培养细胞一代。
  6.重复步骤4。
  7.L1210/DDP细胞株在无抗生素的培养基中培养4——6代,确定污染是否以已被消除。
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